乌头药材不同部位的毒性比较研究 [复制链接]

乌头药材不同部位的毒性比较研究孙桂波徐惠波

中国医学科学院.北京协和医学院药用植物研究所

摘要：目的比较乌头药材不同部位毒性及总生物碱的含量差异，探讨川乌、附子二者临床应用不同的科学依据，为指导其临床应用提供参考。方法改良寇氏法测定LD50，总生物碱的含量测定按版药典附子项下总生物碱含量测定方法测定。结果乌头子根小鼠灌服给药的LD50值为1.g/kg、须根为1.g/kg、母根为1.g/kg，表明须根毒性较母根、子根大，母根、子根毒性接近，总生物碱的测定结果表明须根总生物碱含量最大，母根、子根含量相近。结论生品附子和川乌毒性相近，总生物碱含量相近，提示其药效、临床功用不同可能与炮制方法不同有关；也提示药典中规定去掉须根有一定的科学依据。

附子为毛茛科植物乌头的子根，川乌为其母根。近年来川乌、附子二者混用状况较多[1]。而川乌和附子两味中药的药性和药效不同，临床应用不同。二者的不同是由于成分的差异造成的，还是炮制方法造成的，二者的毒性是否存在差异？另外，药典规定乌头净制时需去掉须根，其净制依据是什么？均无相关的研究报道，本研究是基于临床应用的现象，对乌头不同部位的毒性进行了比较研究，为进一步阐明川乌、附子的物质基础并指导其临床应用提供参考。1材料与方法1.1动物小鼠，体重18～22g，雌雄各半，购于长春市生物制品研究所动物室，合格证号：SX-。1.2药物乌头采集四川江油的鲜品乌头，分成子根、母根、须根。干燥后研成粉末。子根，乳白色粉末状；附子须根、浅棕灰色粉末状；乌头母根，深棕灰色粉末状。用时以蒸馏水配成混悬液，供灌胃给药。1.3方法1.3.1改良寇氏法[2]测定LD50。（1）预实验：取健康小鼠20只，雌雄各半，给药前禁食不禁水16h，随机分为6组，每组雌雄各2只。分别以20mL/kg灌胃给予受试药物，连续观察3d，记录给药后动物反应情况、中毒及死亡情况。找出药物的0%和%估计致死剂量。（2）正式实验：将药物在0%和%估计致死剂量之间按高低剂量比值1∶0.75设7个给药组。取健康小鼠70只，雌雄各半，随机分为7组，每组雌雄各5只，按等比剂量配制药液。给药前动物禁食不禁水16h，按体重给予不同浓度的试药20mL/kg，其后给动物加水、饲料正常饲养。观察动物反应情况，随时记录动物死亡数。连续观察2周，间隔7d称一次体重，结果以Bliss法进行统计学处理[1]。1.3.2总生物碱的含量测定精密称定母根、子根、须根各4g，按版药典附子项下总生物碱含量测定方法测定[3]。2结果2.1乌头子根LD50测定

预实验中乌头子根的%致死量拟定为5g/kg，无毒反应剂量拟定为0.8g/kg；将乌头子根在5g/kg和0.8g/kg之间按1∶0.75设7个给药组进行灌胃给药的LD50的测定。试验过程中观察到0.89g/kg组动物状态良好，无异常反应；5.00、3.75、2.81、2.11、1.58、1.19g/kg剂量给药组，动物不同程度出现萎靡不振、戗毛、不思饮食、大口喘气、口鼻分泌物多，死亡动物出现抽搐症状。但动物死亡都集中在1h内。死亡后立即解剖，肉眼观察小鼠脏器大体正常，给药后第2天，除死亡动物外，其余动物活动均恢复正常，饮食、进水、排便均正常，见表1和表2。

经计算乌头子根小鼠灌服给药的LD50值为1.g/kg，95%可信限为1.g/kg～2.g/kg，最小毒性反应剂量即LD50约为1.g/kg，95%可信限为0.g/kg～1.g/kg。

2.2乌头须根LD50测定

乌头须根的%致死量拟定为3.5g/kg，无毒反应剂量拟定为0.6g/kg；将乌头须根在3.5g/kg和0.4g/kg之间按高低剂量比值1∶0.75设8个给药组进行灌胃给药的LD50的测定，见表3和表4。

试验过程中观察到：0.47g/kg组动物给药后不爱动，添加饲料后可以正常饮食饮水；0.62g/kg组动物给药后不爱动，个别动物出现大口喘气，口鼻分泌物多，添加饲料后不思饮食；0.83，1.11，1.48，1.97，2.63，3.50g/kg剂量给药组，动物不同程度出现萎靡不振、戗毛、不思饮食、大口喘气、口鼻分泌物多，死亡动物出现抽搐症状。但动物死亡集中在1h内。死亡后立即解剖，肉眼观察除1.97g/kg剂量组有一只雄性小鼠心脏稍大、心脏部分出现暗红色外，其他小鼠脏器大体正常，给药后第2天，除死亡动物外，其余动物活动均恢复正常，饮食、进水、排便均正常。经计算乌头须根小鼠灌服给药的LD50值为1.g/kg，95%可信限为1.g/kg～3.g/kg，最小毒性反应剂量即LD5约为0.g/kg，95%可信限为0.g/kg～0.g/kg。2.3乌头母根LD50测定

乌头母根的%致死量拟定为4.5g/kg，无毒反应剂量拟定为0.6g/kg。将在4.5g/kg和0.6g/kg之间按高低剂量比值10.75设7个给药组进行灌胃给药的LD50的测定，见表5。

试验过程中观察到0.60g/kg组动物不爱动，个别小鼠出现喘息，添加饲料后能正常饮食；0.80g/kg组动物不爱动，戗毛，个别小鼠出现喘息，添加饲料后能正常饮食；1.07、1.42、1.90、2.53、3.38、4.50g/kg给药组，动物不同程度出现萎靡不振、戗毛、不思饮食、大口喘气、口鼻分泌物多，死亡动物出现抽搐症状。但动物死亡主要集中在1h内，个别动物死亡时间在1～6h。死亡后立即解剖，有一半动物死亡后心脏出现暗红色，其余小鼠肉眼观察脏器大体正常，给药后第2天，除死亡动物外，其余动物活动均恢复正常，饮食、进水、排便均正常。

经计算乌头母根小鼠灌服给药的LD50值为1.g/kg，95%可信限为1.g/kg～2.g/kg，最小毒性反应剂量即LD5约为0.g/kg，95%可信限为0.g/kg～1.g/kg。2.4乌头不同部位总生物碱的含量测定

结果按版药典附子项下总生物碱含量测定方法测定乌头不同部位总生物碱含量结果表明母根、子根、须根中含有总生物碱分别为、、μg/mL。3讨论附子、川乌为乌头的子根和母根，但二者的临床应用不同。近年来二者混用状况较多。本试验利用同一植株乌头分成子根、母根、须根，对三者的毒性、总生物碱含量进行了比较研究。研究表明，乌头子根小鼠灌服给药的LD50值为1.g/kg、须根为1.g/kg、母根为1.g/kg，说明须根毒性较母根、子根大，母根、子根毒性接近，总生物碱的测定结果表明须根总生物碱含量最大，母根、子根含量相近，提示母根、子根、须根的毒性大小与总生物碱含量呈正相关。总生物碱为乌头类药材的主要毒性部位，含有双酯型生物碱、单酯型生物碱、胺醇型生物碱、脂碱等。其毒性大小均不同，其中双酯型生物碱毒性最大；单酯型生物碱毒性较小；胺醇型生物碱几乎无毒。文献报道附子、川乌主要化学成分均含有乌头碱型生物碱：乌头碱（aconitine）、次乌头碱（hypaconitine）、中乌头碱（mesaconitine），其他化学成分各有所异。附子中还含有氯化棍掌碱（coryneinechlorid）、去甲猪毛菜碱（salsolino1）、去甲乌药碱（higenamine）；川乌中还含有塔垃乌头胺（talalisamine）、川乌碱甲、川乌碱乙、卡乌碱（carmicmichaline）、异乌头碱（iscaconitine）等[4]。提示附子、川乌的毒性与生物碱的种类及各类生物碱成分在总生物碱中所占的比例有关，有待深入研究。本研究发现须根毒性最大，提示药典中规定去掉须根有一定的科学依据。附子具有局麻、强心、抗炎、升压等多种药理活性成分，为回阳救逆、补火助阳之要药；川乌经炮制后用于风寒湿痹、肢体疼痛、心腹冷痛、疝痛、跌打剧痛等。二者炮制方法差异较大，临床功用不同可能与炮制相关，同样的炮制能否使二者有相似的疗效，子根是否能够代替母根做为川乌使用，有待于结合炮制、药理进一步研究。参考文献：[1]滕爱武，孙巧英，刘蕾.川乌与附子不可混用[J]．时珍国医国药，，11（10）：.[2]张文贵.药理学计算与程序[M].北京：人民卫生出版社，：1-.[3]国家药典委员会.中国药典[S].中国医药科技出版社，：-.[4]王英豪.从化学、药理学和炮制的角度探讨附子、川乌和草乌的传统应用[J].光明中医，：24（9）：-.